65 വയസ്സിനു മുകളിലുള്ളവരെ ബാധിക്കുന്ന ദീർഘകാല ക്രോണിക് ഡീജനറേറ്റീവ് അസ്ഥി സന്ധി രോഗങ്ങളിൽ ഒന്നാണ് ഓസ്റ്റിയോ ആർത്രൈറ്റിസ് (OA).
1]. സാധാരണയായി, OA രോഗികളിൽ തരുണാസ്ഥിയുടെ കേടുപാടുകൾ, വീക്കം സംഭവിച്ച സിനോവിയം, കോണ്ട്രോസൈറ്റുകൾ എന്നിവ കാണപ്പെടുന്നു, ഇത് വേദനയ്ക്കും ശാരീരിക അസ്വസ്ഥതയ്ക്കും കാരണമാകുന്നു [
2]. സന്ധിവേദന പ്രധാനമായും വീക്കം മൂലം സന്ധികളിലെ തരുണാസ്ഥി നശിക്കുന്നതാണ് കാരണം, തരുണാസ്ഥിക്ക് ഗുരുതരമായി കേടുപാടുകൾ സംഭവിക്കുമ്പോൾ അസ്ഥികൾ പരസ്പരം കൂട്ടിയിടിച്ച് അസഹനീയമായ വേദനയും ശാരീരിക ബുദ്ധിമുട്ടും ഉണ്ടാക്കാം [
3]. വേദന, നീർവീക്കം, സന്ധിയുടെ കാഠിന്യം തുടങ്ങിയ ലക്ഷണങ്ങളുള്ള വീക്കം ഉണ്ടാക്കുന്ന മധ്യസ്ഥരുടെ പങ്കാളിത്തം നന്നായി രേഖപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്. OA രോഗികളിൽ, തരുണാസ്ഥി, സബ്കോണ്ട്രൽ അസ്ഥി എന്നിവയുടെ മണ്ണൊലിപ്പിന് കാരണമാകുന്ന വീക്കം ഉണ്ടാക്കുന്ന സൈറ്റോകൈനുകൾ സൈനോവിയൽ ദ്രാവകത്തിൽ കാണപ്പെടുന്നു [
4]. OA രോഗികൾക്ക് സാധാരണയായി അനുഭവപ്പെടുന്ന രണ്ട് പ്രധാന പരാതികൾ വേദനയും സൈനോവിയൽ വീക്കവുമാണ്. അതിനാൽ, നിലവിലെ OA ചികിത്സകളുടെ പ്രാഥമിക ലക്ഷ്യങ്ങൾ വേദനയും വീക്കവും കുറയ്ക്കുക എന്നതാണ്. [
5]. സ്റ്റിറോയിഡല്ലാത്തതും സ്റ്റിറോയിഡ് മരുന്നുകളും ഉൾപ്പെടെ ലഭ്യമായ OA ചികിത്സകൾ വേദനയും വീക്കവും കുറയ്ക്കുന്നതിൽ ഫലപ്രദമാണെന്ന് തെളിയിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ടെങ്കിലും, ഈ മരുന്നുകളുടെ ദീർഘകാല ഉപയോഗം ഹൃദയ സംബന്ധമായ, ദഹനനാളത്തിന്റെ, വൃക്കസംബന്ധമായ തകരാറുകൾ പോലുള്ള ഗുരുതരമായ ആരോഗ്യ പ്രത്യാഘാതങ്ങൾക്ക് കാരണമാകുന്നു [
6]. അതിനാൽ, ഓസ്റ്റിയോ ആർത്രൈറ്റിസ് ചികിത്സയ്ക്കായി കൂടുതൽ ഫലപ്രദമായ പാർശ്വഫലങ്ങൾ കുറഞ്ഞ ഒരു മരുന്ന് വികസിപ്പിക്കേണ്ടതുണ്ട്.
സുരക്ഷിതവും എളുപ്പത്തിൽ ലഭ്യമാകുന്നതും ആയതിനാൽ പ്രകൃതിദത്ത ആരോഗ്യ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ കൂടുതൽ പ്രചാരത്തിലായിക്കൊണ്ടിരിക്കുകയാണ് [
7]. പരമ്പരാഗത കൊറിയൻ മരുന്നുകൾ ആർത്രൈറ്റിസ് ഉൾപ്പെടെയുള്ള നിരവധി കോശജ്വലന രോഗങ്ങൾക്കെതിരെ ഫലപ്രദമാണെന്ന് തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട് [
8]. ഓക്ക്‌ലാൻഡ്യ ലപ്പ ഡിസി. വേദന ശമിപ്പിക്കുന്നതിനും വയറിന് ആശ്വാസം നൽകുന്നതിനുമായി ക്വിയുടെ രക്തചംക്രമണം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നത് പോലുള്ള ഔഷധ ഗുണങ്ങൾക്ക് പേരുകേട്ടതാണ്, കൂടാതെ പരമ്പരാഗതമായി പ്രകൃതിദത്ത വേദനസംഹാരിയായി ഉപയോഗിച്ചുവരുന്നു [
9]. മുൻ റിപ്പോർട്ടുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് എ. ലപ്പയിൽ ആന്റി-ഇൻഫ്ലമേറ്ററി ഉണ്ടെന്നാണ് [
10,
11], വേദനസംഹാരി [
12], കാൻസർ വിരുദ്ധം [
13], കൂടാതെ ഗ്യാസ്ട്രോപ്രൊട്ടക്റ്റീവ് [
14] ഫലങ്ങൾ. എ. ലപ്പയുടെ വിവിധ ജൈവിക പ്രവർത്തനങ്ങൾക്ക് കാരണം അതിന്റെ പ്രധാന സജീവ സംയുക്തങ്ങളാണ്: കോസ്റ്റുനോലൈഡ്, ഡിഹൈഡ്രോകോസ്റ്റസ് ലാക്ടോൺ, ഡൈഹൈഡ്രോകോസ്റ്റുനോലൈഡ്, കോസ്റ്റുസ്ലാക്റ്റോൺ, α-കോസ്റ്റോൾ, സോസൂറിയ ലാക്ടോൺ, കോസ്റ്റുസ്ലാക്റ്റോൺ [
15]. മുൻകാല പഠനങ്ങൾ അവകാശപ്പെടുന്നത് കോസ്റ്റുനോലൈഡ് ലിപ്പോപൊളിസാക്കറൈഡിൽ (LPS) ആന്റി-ഇൻഫ്ലമേറ്ററി ഗുണങ്ങൾ കാണിച്ചിരുന്നു എന്നാണ്, ഇത് NF-kB യുടെയും ഹീറ്റ് ഷോക്ക് പ്രോട്ടീൻ പാതയുടെയും നിയന്ത്രണത്തിലൂടെ മാക്രോഫേജുകളെ പ്രേരിപ്പിച്ചു [
16,
17]. എന്നിരുന്നാലും, OA ചികിത്സയിൽ A. ലപ്പയുടെ സാധ്യതയുള്ള പ്രവർത്തനങ്ങളെക്കുറിച്ച് ഒരു പഠനവും അന്വേഷിച്ചിട്ടില്ല. (മോണോസോഡിയം-അയഡോഅസെറ്റേറ്റ്) MIA, അസറ്റിക് ആസിഡ്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് എലി മോഡലുകൾ എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് OA യ്‌ക്കെതിരെ A. ലപ്പയുടെ ചികിത്സാ ഫലങ്ങൾ ഈ ഗവേഷണം അന്വേഷിച്ചു.
മൃഗങ്ങളിൽ OA യുടെ വേദന സ്വഭാവങ്ങളും പാത്തോഫിസിയോളജിക്കൽ സവിശേഷതകളും ഉത്പാദിപ്പിക്കാൻ മോണോസോഡിയം-അയഡോഅസെറ്റേറ്റ് (MIA) പ്രശസ്തമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു [
18,
19,
20]. കാൽമുട്ട് സന്ധികളിൽ കുത്തിവയ്ക്കുമ്പോൾ, MIA കോണ്ട്രോസൈറ്റ് മെറ്റബോളിസത്തെ അസ്വസ്ഥമാക്കുകയും വീക്കം, തരുണാസ്ഥി, സബ്കോണ്ട്രൽ അസ്ഥി മണ്ണൊലിപ്പ് തുടങ്ങിയ വീക്കം ലക്ഷണങ്ങൾക്ക് കാരണമാവുകയും ചെയ്യുന്നു, ഇത് OA യുടെ പ്രധാന ലക്ഷണങ്ങളാണ് [
18]. അസറ്റിക് ആസിഡ് ഉപയോഗിച്ച് പ്രേരിപ്പിച്ച റൈറ്റിംഗ് പ്രതികരണം മൃഗങ്ങളിലെ പെരിഫറൽ വേദനയുടെ സിമുലേഷനായി വ്യാപകമായി കണക്കാക്കപ്പെടുന്നു, അവിടെ വീക്കം വേദനയെ അളവനുസരിച്ച് അളക്കാൻ കഴിയും [
19]. വീക്കത്തോടുള്ള കോശ പ്രതികരണങ്ങൾ പഠിക്കാൻ മൗസ് മാക്രോഫേജ് സെൽ ലൈൻ, RAW264.7, വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു. LPS ഉപയോഗിച്ച് സജീവമാക്കുമ്പോൾ, RAW264 മാക്രോഫേജുകൾ കോശജ്വലന പാതകളെ സജീവമാക്കുകയും TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS, IL-6 എന്നിങ്ങനെ നിരവധി കോശജ്വലന ഇടനിലക്കാരെ സ്രവിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു [
20]. MIA അനിമൽ മോഡൽ, അസറ്റിക് ആസിഡ്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് അനിമൽ മോഡൽ, LPS-ആക്ടിവേറ്റഡ് RAW264.7 സെല്ലുകൾ എന്നിവയിൽ OA-യ്‌ക്കെതിരെ A. ലപ്പയുടെ ആന്റി-നോസിസെപ്റ്റീവ്, ആന്റി-ഇൻഫ്ലമേറ്ററി ഇഫക്റ്റുകൾ ഈ പഠനം വിലയിരുത്തി.
2. മെറ്റീരിയലുകളും രീതികളും
2.1. സസ്യ വസ്തുക്കൾ
പരീക്ഷണത്തിൽ ഉപയോഗിച്ച എ. ലപ്പ ഡിസിയുടെ ഉണങ്ങിയ വേര് എപ്പുലിപ് ഫാർമസ്യൂട്ടിക്കൽ കമ്പനി ലിമിറ്റഡിൽ (സിയോൾ, കൊറിയ) നിന്ന് ശേഖരിച്ചതാണ്. ഗച്ചോൺ സർവകലാശാലയിലെ ഹെർബൽ ഫാർമക്കോളജി വിഭാഗം കേണൽ ഓഫ് കൊറിയൻ മെഡിസിൻ പ്രൊഫ. ഡോങ്‌ഹുൻ ലീ ഇത് തിരിച്ചറിഞ്ഞു, വൗച്ചർ സ്പെസിമെൻ നമ്പർ 18060301 ആയി നിക്ഷേപിച്ചു.
2.2. എ. ലപ്പ എക്സ്ട്രാക്റ്റിന്റെ HPLC വിശകലനം
ഒരു റിഫ്ലക്സ് ഉപകരണം (ഡിസ്റ്റിൽഡ് വാട്ടർ, 100 °C-ൽ 3 മണിക്കൂർ) ഉപയോഗിച്ചാണ് എ. ലപ്പ വേർതിരിച്ചെടുത്തത്. കുറഞ്ഞ മർദ്ദത്തിലുള്ള ബാഷ്പീകരണം ഉപയോഗിച്ച് വേർതിരിച്ചെടുത്ത ലായനി ഫിൽട്ടർ ചെയ്ത് ഘനീഭവിപ്പിച്ചു. −80 °C-ൽ ഫ്രീസ്-ഡ്രൈ ചെയ്തതിന് ശേഷം എ. ലപ്പ സത്തിൽ നിന്ന് 44.69% വിളവ് ലഭിച്ചു. 1260 ഇൻഫിനിറ്റിⅡ HPLC-സിസ്റ്റം (അജിലന്റ്, പാൽ ആൾട്ടോ, CA, USA) ഉപയോഗിച്ച് ബന്ധിപ്പിച്ച ഒരു HPLC ഉപയോഗിച്ച് എ. ലപ്പയുടെ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് വിശകലനം നടത്തി. ക്രോമാറ്റിക് വേർതിരിക്കലിനായി, 35 °C-ൽ എക്ലിപ്സ്എക്സ്ഡിബി സി18 കോളം (4.6 × 250 മിമി, 5 µm, അജിലന്റ്) ഉപയോഗിച്ചു. ആകെ 100 മില്ലിഗ്രാം മാതൃക 10 മില്ലി 50% മെഥനോളിൽ ലയിപ്പിച്ച് 10 മിനിറ്റ് സോണിക്കേറ്റ് ചെയ്തു. 0.45 μm ന്റെ ഒരു സിറിഞ്ച് ഫിൽട്ടർ (വാട്ടേഴ്സ് കോർപ്പ്, മിൽഫോർഡ്, എംഎ, യുഎസ്എ) ഉപയോഗിച്ച് സാമ്പിളുകൾ ഫിൽട്ടർ ചെയ്തു. മൊബൈൽ ഫേസ് കോമ്പോസിഷൻ 0.1% ഫോസ്ഫോറിക് ആസിഡ് (A), അസെറ്റോണിട്രൈൽ (B) എന്നിവയായിരുന്നു, കോളം ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ വേർതിരിച്ചു: 0–60 മിനിറ്റ്, 0%; 60–65 മിനിറ്റ്, 100%; 65–67 മിനിറ്റ്, 100%; 67–72 മിനിറ്റ്, 0% ലായക B, 1.0 mL/min എന്ന ഫ്ലോ റേറ്റ്. 10 μL എന്ന ഇഞ്ചക്ഷൻ വോളിയം ഉപയോഗിച്ച് 210 nm ൽ മലിനജലം നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു. വിശകലനം മൂന്ന് തവണയായി നടത്തി.
2.3. മൃഗസംരക്ഷണവും മാനേജ്മെന്റും
5 ആഴ്ച പ്രായമുള്ള ആൺ സ്പ്രാഗ്-ഡാവ്‌ലി (SD) എലികളെയും 6 ആഴ്ച പ്രായമുള്ള ആൺ ICR എലികളെയും സാംടാക്കോ ബയോ കൊറിയയിൽ (ഗ്യോങ്‌ഗി-ഡോ, കൊറിയ) നിന്ന് വാങ്ങി. സ്ഥിരമായ താപനില (22 ± 2 °C), ഈർപ്പം (55 ± 10%), 12/12 മണിക്കൂർ വെളിച്ചം/ഇരുട്ട് ചക്രം എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് മൃഗങ്ങളെ ഒരു മുറിയിൽ സൂക്ഷിച്ചു. പരീക്ഷണം ആരംഭിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ഒരു ആഴ്ചയിലധികം മൃഗങ്ങൾക്ക് ഈ അവസ്ഥയെക്കുറിച്ച് പരിചയമുണ്ടായിരുന്നു. മൃഗങ്ങൾക്ക് തീറ്റയും വെള്ളവും സൗജന്യമായി വിതരണം ചെയ്തിരുന്നു. ഗച്ചോൺ സർവകലാശാലയിലെ (GIACUC-R2019003) മൃഗസംരക്ഷണത്തിനും കൈകാര്യം ചെയ്യലിനുമുള്ള നിലവിലെ നൈതിക നിയമങ്ങൾ എല്ലാ മൃഗ പരീക്ഷണ നടപടിക്രമങ്ങളിലും കർശനമായി പാലിച്ചു. ഇൻവെസ്റ്റിഗേറ്റർ-ബ്ലൈൻഡഡ്, സമാന്തര പരീക്ഷണമാണ് പഠനം രൂപകൽപ്പന ചെയ്തത്. ആനിമൽ എക്സ്പിരിമെന്റൽ എത്തിക്സ് കമ്മിറ്റിയുടെ മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾക്കനുസൃതമായി ഞങ്ങൾ ദയാവധ രീതി പിന്തുടർന്നു.
2.4. MIA കുത്തിവയ്പ്പും ചികിത്സയും
എലികളെ ക്രമരഹിതമായി 4 ഗ്രൂപ്പുകളായി വേർതിരിച്ചു, അതായത് ഷാം, കൺട്രോൾ, ഇൻഡോമെതസിൻ, എ. ലപ്പ. 2% ഐസോഫ്ലൂറൻ O2 മിശ്രിതം ഉപയോഗിച്ച് അനസ്തേഷ്യ നൽകി, എലികളിൽ 50 μL MIA (40 mg/m²; സിഗ്മ-ആൽഡ്രിച്ച്, സെന്റ് ലൂയിസ്, MO, USA) ഉപയോഗിച്ച് കാൽമുട്ട് സന്ധികളിൽ ഇൻട്രാ-ആർട്ടിക്യുലർ ആയി കുത്തിവച്ചു, പരീക്ഷണാത്മക OA ഉണ്ടാക്കി. താഴെപ്പറയുന്ന രീതിയിലാണ് ചികിത്സകൾ നടത്തിയത്: നിയന്ത്രണവും വ്യാജ ഗ്രൂപ്പുകളും AIN-93G അടിസ്ഥാന ഭക്ഷണക്രമം ഉപയോഗിച്ച് മാത്രമേ നിലനിർത്തിയിട്ടുള്ളൂ. ഇൻഡോമെതസിൻ ഗ്രൂപ്പിന് AIN-93G ഡയറ്റിൽ ഉൾപ്പെടുത്തിയ ഇൻഡോമെതസിൻ (3 mg/kg) നൽകി, A. ലപ്പ 300 mg/kg ഗ്രൂപ്പിന് A. ലപ്പ (300 mg/kg) സപ്ലിമെന്റഡ് AIN-93G ഡയറ്റ് നൽകി. OA ഇൻഡക്ഷൻ ചെയ്ത ദിവസം മുതൽ 24 ദിവസത്തേക്ക് 190–210 ഗ്രാം ശരീരഭാരത്തിന് 15–17 ഗ്രാം എന്ന നിരക്കിൽ ചികിത്സകൾ തുടർന്നു.
2.5. ഭാരം വഹിക്കുന്ന അളവ്
OA ഇൻഡക്ഷനുശേഷം, ഷെഡ്യൂൾ ചെയ്തതുപോലെ ഇൻകാസിറ്റൻസ്-മീറ്റർടെസ്റ്റർ600 (ഐഐടിസി ലൈഫ് സയൻസ്, വുഡ്‌ലാൻഡ് ഹിൽസ്, സിഎ, യുഎസ്എ) ഉപയോഗിച്ച് എലികളുടെ പിൻകാലുകളുടെ ഭാരം വഹിക്കാനുള്ള ശേഷി അളക്കൽ നടത്തി. പിൻകാലുകളിലെ ഭാരം വിതരണം കണക്കാക്കി: ഭാരം വഹിക്കാനുള്ള ശേഷി (%)
