ഓസ്റ്റിയോ ആർത്രൈറ്റിസ് (OA) 65 വയസ്സിനു മുകളിലുള്ളവരെ ബാധിക്കുന്ന ദീർഘകാല ക്രോണിക് ഡിജനറേറ്റീവ് ബോൺ ജോയിൻ്റ് രോഗങ്ങളിൽ ഒന്നാണ്.
1]. സാധാരണയായി, OA രോഗികൾക്ക് കേടുപാടുകൾ സംഭവിച്ച തരുണാസ്ഥി, വീക്കം സംഭവിച്ച സിനോവിയം, വേദനയും ശാരീരിക അസ്വസ്ഥതകളും ഉണ്ടാക്കുന്ന ശോഷണം സംഭവിച്ച കോണ്ട്രോസൈറ്റുകൾ എന്നിവ രോഗനിർണയം നടത്തുന്നു.
2]. സന്ധിവേദന പ്രധാനമായും സന്ധികളിലെ തരുണാസ്ഥിയിലെ വീക്കം മൂലമുള്ള അപചയം മൂലമാണ് ഉണ്ടാകുന്നത്, തരുണാസ്ഥിക്ക് ഗുരുതരമായ കേടുപാടുകൾ സംഭവിക്കുമ്പോൾ അസ്ഥികൾ പരസ്പരം കൂട്ടിയിടിച്ച് അസഹനീയമായ വേദനയും ശാരീരിക ബുദ്ധിമുട്ടുകളും ഉണ്ടാക്കുന്നു.
3]. വേദന, വീക്കം, സന്ധിയുടെ കാഠിന്യം തുടങ്ങിയ ലക്ഷണങ്ങളുള്ള കോശജ്വലന മധ്യസ്ഥരുടെ ഇടപെടൽ നന്നായി രേഖപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്. OA രോഗികളിൽ, തരുണാസ്ഥി, സബ്കോണ്ട്രൽ അസ്ഥി എന്നിവയുടെ മണ്ണൊലിപ്പിന് കാരണമാകുന്ന കോശജ്വലന സൈറ്റോകൈനുകൾ സൈനോവിയൽ ദ്രാവകത്തിൽ കാണപ്പെടുന്നു.
4]. OA രോഗികൾക്ക് സാധാരണയായി ഉണ്ടാകുന്ന രണ്ട് പ്രധാന പരാതികൾ വേദനയും സിനോവിയൽ വീക്കം ആണ്. അതിനാൽ നിലവിലെ OA തെറാപ്പിയുടെ പ്രാഥമിക ലക്ഷ്യങ്ങൾ വേദനയും വീക്കവും കുറയ്ക്കുക എന്നതാണ്. [
5]. നോൺ-സ്റ്റിറോയിഡൽ, സ്റ്റിറോയിഡൽ മരുന്നുകൾ ഉൾപ്പെടെയുള്ള ലഭ്യമായ OA ചികിത്സകൾ, വേദനയും വീക്കവും ലഘൂകരിക്കുന്നതിൽ ഫലപ്രാപ്തി തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ടെങ്കിലും, ഈ മരുന്നുകളുടെ ദീർഘകാല ഉപയോഗത്തിന് ഹൃദയ, ഗ്യാസ്ട്രോ-ഇൻ്റസ്റ്റൈനൽ, വൃക്കസംബന്ധമായ തകരാറുകൾ തുടങ്ങിയ ഗുരുതരമായ ആരോഗ്യ പ്രത്യാഘാതങ്ങൾ ഉണ്ട്.
6]. അതിനാൽ, ഓസ്റ്റിയോ ആർത്രൈറ്റിസ് ചികിത്സയ്ക്കായി കുറച്ച് പാർശ്വഫലങ്ങളുള്ള കൂടുതൽ ഫലപ്രദമായ മരുന്ന് വികസിപ്പിക്കേണ്ടതുണ്ട്.
സുരക്ഷിതവും എളുപ്പത്തിൽ ലഭ്യവുമാകാൻ പ്രകൃതിദത്ത ആരോഗ്യ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ കൂടുതൽ പ്രചാരത്തിലുണ്ട് [
7]. പരമ്പരാഗത കൊറിയൻ മരുന്നുകൾ സന്ധിവാതം ഉൾപ്പെടെ നിരവധി കോശജ്വലന രോഗങ്ങൾക്കെതിരെ ഫലപ്രാപ്തി തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്.
8]. ഓക്ക്ലാൻഡിയ ലാപ്പ ഡിസി. ക്വിയുടെ രക്തചംക്രമണം മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിനും വേദന ഒഴിവാക്കുന്നതിനും ആമാശയത്തെ ശമിപ്പിക്കുന്നതിനും ഇത് ഔഷധ ഗുണങ്ങൾക്ക് പേരുകേട്ടതാണ്, പരമ്പരാഗതമായി ഇത് പ്രകൃതിദത്ത വേദനസംഹാരിയായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.
9]. മുൻ റിപ്പോർട്ടുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് എ. ലാപ്പയ്ക്ക് ആൻറി-ഇൻഫ്ലമേറ്ററി [
10,
11], വേദനസംഹാരി [
12], കാൻസർ വിരുദ്ധ [
13], ഗ്യാസ്ട്രോപ്രൊട്ടക്റ്റീവ് [
14] ഇഫക്റ്റുകൾ. എ. ലാപ്പയുടെ വിവിധ ജൈവ പ്രവർത്തനങ്ങൾ അതിൻ്റെ പ്രധാന സജീവ സംയുക്തങ്ങൾ മൂലമാണ്: കോസ്റ്റുനോലൈഡ്, ഡിഹൈഡ്രോകോസ്റ്റസ് ലാക്റ്റോൺ, ഡൈഹൈഡ്രോകോസ്റ്റുനോലൈഡ്, കോസ്റ്റസ്ലാക്റ്റോൺ, α-കോസ്റ്റോൾ, സോസ്യൂറിയ ലാക്റ്റോൺ, കോസ്റ്റസ്ലാക്റ്റോൺ [
15]. എൻഎഫ്-കെബി, ഹീറ്റ് ഷോക്ക് പ്രോട്ടീൻ പാത്ത്‌വേ എന്നിവയുടെ നിയന്ത്രണത്തിലൂടെ മാക്രോഫേജുകളെ പ്രേരിപ്പിച്ച ലിപ്പോപോളിസാക്കറൈഡിൽ (എൽപിഎസ്) കോസ്റ്റുനോലൈഡ് ആൻറി-ഇൻഫ്ലമേറ്ററി ഗുണങ്ങളുണ്ടെന്ന് മുൻകാല പഠനങ്ങൾ അവകാശപ്പെടുന്നു.
16,
17]. എന്നിരുന്നാലും, OA ചികിത്സയ്ക്കായി A. ലാപ്പയുടെ സാധ്യതയുള്ള പ്രവർത്തനങ്ങളെക്കുറിച്ച് ഒരു പഠനവും അന്വേഷിച്ചിട്ടില്ല. (മോണോസോഡിയം-അയോഡോഅസെറ്റേറ്റ്) MIA, അസറ്റിക് ആസിഡ്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് എലി മോഡലുകൾ എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് OA-യ്‌ക്കെതിരായ A. ലാപ്പയുടെ ചികിത്സാ ഫലങ്ങളെക്കുറിച്ച് ഇപ്പോഴത്തെ ഗവേഷണം അന്വേഷിച്ചു.
മോണോസോഡിയം-അയോഡോഅസെറ്റേറ്റ് (MIA) മൃഗങ്ങളിൽ OA യുടെ വേദന സ്വഭാവങ്ങളും പാത്തോഫിസിയോളജിക്കൽ സവിശേഷതകളും ഉത്പാദിപ്പിക്കാൻ പ്രസിദ്ധമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.
18,
19,
20]. കാൽമുട്ടിൻ്റെ സന്ധികളിൽ കുത്തിവയ്ക്കുമ്പോൾ, എംഐഎ, കോണ്ട്രോസൈറ്റ് മെറ്റബോളിസത്തെ താറുമാറാക്കുകയും OA യുടെ പ്രധാന ലക്ഷണങ്ങളായ തരുണാസ്ഥി, സബ്കോണ്ട്രൽ അസ്ഥി മണ്ണൊലിപ്പ് എന്നിവ പോലുള്ള വീക്കം, കോശജ്വലന ലക്ഷണങ്ങൾ എന്നിവ ഉണ്ടാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.
18]. അസറ്റിക് അമ്ലത്തോടുകൂടിയ റൈറ്റിംഗ് പ്രതികരണം മൃഗങ്ങളിലെ പെരിഫറൽ വേദനയുടെ അനുകരണമായി പരക്കെ കണക്കാക്കപ്പെടുന്നു, അവിടെ കോശജ്വലന വേദനയുടെ അളവ് അളക്കാൻ കഴിയും.
19]. മൗസ് മാക്രോഫേജ് സെൽ ലൈൻ, RAW264.7, വീക്കം സംബന്ധിച്ച സെല്ലുലാർ പ്രതികരണങ്ങൾ പഠിക്കാൻ ജനപ്രിയമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു. LPS ഉപയോഗിച്ച് സജീവമാക്കുമ്പോൾ, RAW264 മാക്രോഫേജുകൾ കോശജ്വലന പാതകളെ സജീവമാക്കുകയും, TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS, IL-6 എന്നിങ്ങനെയുള്ള നിരവധി കോശജ്വലന ഇടനിലക്കാരെ സ്രവിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.
20]. എംഐഎ അനിമൽ മോഡൽ, അസറ്റിക് ആസിഡ്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് അനിമൽ മോഡൽ, എൽപിഎസ്-ആക്ടിവേറ്റഡ് RAW264.7 സെല്ലുകൾ എന്നിവയിൽ OA-യ്‌ക്കെതിരായ A. ലാപ്പയുടെ ആൻ്റി-നോസിസെപ്റ്റീവ്, ആൻ്റി-ഇൻഫ്ലമേറ്ററി ഇഫക്റ്റുകൾ ഈ പഠനം വിലയിരുത്തി.
2. മെറ്റീരിയലുകളും രീതികളും
2.1 പ്ലാൻ്റ് മെറ്റീരിയൽ
എ ലാപ്പ ഡിസിയുടെ ഉണങ്ങിയ റൂട്ട്. പരീക്ഷണത്തിൽ ഉപയോഗിച്ചത് എപ്പുലിപ് ഫാർമസ്യൂട്ടിക്കൽ കമ്പനി ലിമിറ്റഡിൽ നിന്ന് (സിയോൾ, കൊറിയ) വാങ്ങിയതാണ്. ഗച്ചോൺ യൂണിവേഴ്സിറ്റിയിലെ കൊറിയൻ മെഡിസിൻ കേണൽ ഓഫ് ഹെർബൽ ഫാർമക്കോളജി വിഭാഗം പ്രൊഫ. ഡോംഗുൻ ലീ ഇത് തിരിച്ചറിഞ്ഞു, വൗച്ചർ സ്പെസിമെൻ നമ്പർ 18060301 ആയി നിക്ഷേപിച്ചു.
2.2 എ ലാപ്പ എക്സ്ട്രാക്റ്റിൻ്റെ എച്ച്പിഎൽസി വിശകലനം
ഒരു റിഫ്ലക്സ് ഉപകരണം ഉപയോഗിച്ചാണ് A. ലാപ്പ വേർതിരിച്ചെടുത്തത് (വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം, 100 °C താപനിലയിൽ 3 മണിക്കൂർ). വേർതിരിച്ചെടുത്ത ലായനി ഒരു താഴ്ന്ന മർദ്ദത്തിലുള്ള ബാഷ്പീകരണ ഉപകരണം ഉപയോഗിച്ച് ഫിൽട്ടർ ചെയ്യുകയും ഘനീഭവിക്കുകയും ചെയ്തു. എ. ലാപ്പ സത്തിൽ −80 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഫ്രീസ്-ഡ്രൈ ചെയ്തതിന് ശേഷം 44.69% വിളവ് ലഭിച്ചു. 1260 ഇൻഫിനിറ്റിⅡ HPLC-സിസ്റ്റം (Agilent, Pal Alto, CA, USA) ഉപയോഗിച്ച് ബന്ധിപ്പിച്ച ഒരു HPLC ഉപയോഗിച്ചാണ് A. ലാപ്പയുടെ ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് വിശകലനം നടത്തിയത്. ക്രോമാറ്റിക് വേർതിരിക്കലിനായി, EclipseXDB C18 കോളം (4.6 × 250 mm, 5 µm, എജിലൻ്റ്) 35 °C-ൽ ഉപയോഗിച്ചു. മൊത്തം 100 മില്ലിഗ്രാം മാതൃക 10 മില്ലി 50% മെഥനോളിൽ ലയിപ്പിച്ച് 10 മിനിറ്റ് സോണിക്കേറ്റ് ചെയ്തു. 0.45 μm ഒരു സിറിഞ്ച് ഫിൽട്ടർ (വാട്ടേഴ്സ് കോർപ്പറേഷൻ, മിൽഫോർഡ്, MA, USA) ഉപയോഗിച്ച് സാമ്പിളുകൾ ഫിൽട്ടർ ചെയ്തു. മൊബൈൽ ഫേസ് കോമ്പോസിഷൻ 0.1% ഫോസ്ഫോറിക് ആസിഡും (എ), അസെറ്റോണിട്രൈലും (ബി) ആണ്, കൂടാതെ കോളം ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ ഒഴിവാക്കി: 0-60 മിനിറ്റ്, 0%; 60-65 മിനിറ്റ്, 100%; 65-67 മിനിറ്റ്, 100%; 67-72 മിനിറ്റ്, 1.0 mL/min ഫ്ലോ റേറ്റ് ഉള്ള 0% ലായക ബി. 10 μL ഇഞ്ചക്ഷൻ വോളിയം ഉപയോഗിച്ച് 210 nm-ൽ മലിനജലം നിരീക്ഷിച്ചു. വിശകലനം മൂന്ന് തവണയായി നടത്തി.
2.3 അനിമൽ ഹൗസിംഗും മാനേജ്മെൻ്റും
5 ആഴ്‌ച പ്രായമുള്ള ആൺ സ്‌പ്രാഗ്-ഡാവ്‌ലി (എസ്‌ഡി) എലികളെയും ആറാഴ്‌ച പ്രായമുള്ള ആൺ ഐസിആർ എലികളെയും സാംതാക്കോ ബയോ കൊറിയയിൽ നിന്ന് (ഗ്യോങ്‌ഗി-ഡോ, കൊറിയ) വാങ്ങി. സ്ഥിരമായ ഊഷ്മാവ് (22 ± 2 °C), ഈർപ്പം (55 ± 10%), 12/12 മണിക്കൂർ പ്രകാശം/ഇരുണ്ട ചക്രം എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് മൃഗങ്ങളെ ഒരു മുറിയിൽ സൂക്ഷിച്ചു. പരീക്ഷണം ആരംഭിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് മൃഗങ്ങൾക്ക് ഒരാഴ്ചയിലേറെ ഈ അവസ്ഥയെക്കുറിച്ച് പരിചിതമായിരുന്നു. മൃഗങ്ങൾക്ക് തീറ്റയും വെള്ളവും ആഡ് ലിബിറ്റം വിതരണമുണ്ടായിരുന്നു. ഗച്ചോൺ യൂണിവേഴ്സിറ്റിയിലെ (GIACUC-R2019003) മൃഗസംരക്ഷണത്തിനും കൈകാര്യം ചെയ്യലിനും നിലവിലുള്ള ധാർമ്മിക നിയമങ്ങൾ എല്ലാ മൃഗ പരീക്ഷണ നടപടിക്രമങ്ങളിലും കർശനമായി പാലിച്ചു. ഇൻവെസ്റ്റിഗേറ്റർ അന്ധവും സമാന്തരവുമായ വിചാരണയാണ് പഠനം രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിരിക്കുന്നത്. അനിമൽ എക്‌സ്‌പെരിമെൻ്റൽ എത്തിക്‌സ് കമ്മിറ്റിയുടെ മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾക്കനുസൃതമായി ഞങ്ങൾ ദയാവധ രീതിയാണ് പിന്തുടരുന്നത്.
2.4 MIA കുത്തിവയ്പ്പും ചികിത്സയും
എലികളെ ക്രമരഹിതമായി 4 ഗ്രൂപ്പുകളായി തിരിച്ചിരിക്കുന്നു, അതായത് ഷാം, കൺട്രോൾ, ഇൻഡോമെതസിൻ, എ.ലാപ്പ. 2% ഐസോഫ്ലൂറൻ O2 മിശ്രിതം ഉപയോഗിച്ച് അനസ്തേഷ്യ നൽകിയ എലികൾക്ക് 50 μL MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ഉപയോഗിച്ച് കാൽമുട്ടിൻ്റെ സന്ധികളിലേക്ക് ഇൻട്രാ-ആർട്ടിക്യുലർ ആയി പരീക്ഷണ OA-ലേക്ക് നയിക്കും. താഴെ പറയുന്ന രീതിയിൽ ചികിത്സകൾ നടത്തി: നിയന്ത്രണവും ഷാം ഗ്രൂപ്പുകളും AIN-93G അടിസ്ഥാന ഭക്ഷണക്രമത്തിൽ മാത്രം നിലനിർത്തി. ഇൻഡോമെതസിൻ ഗ്രൂപ്പിന് ഇൻഡോമെതസിൻ (3 മില്ലിഗ്രാം/കിലോഗ്രാം) AIN-93G ഡയറ്റിൽ ഉൾപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്, കൂടാതെ A. ലാപ്പ (300 mg/kg) സപ്ലിമെൻ്റായ AIN-93G ഡയറ്റിലേക്ക് A. ലാപ്പ 300 mg/kg ഗ്രൂപ്പിന് നൽകിയിട്ടുണ്ട്. പ്രതിദിനം 190-210 ഗ്രാം ശരീരഭാരത്തിന് 15-17 ഗ്രാം എന്ന നിരക്കിൽ OA ഇൻഡക്ഷൻ ദിവസം മുതൽ 24 ദിവസത്തേക്ക് ചികിത്സകൾ തുടർന്നു.
2.5 ഭാരം വഹിക്കുന്ന അളവ്
OA ഇൻഡക്ഷന് ശേഷം, ഷെഡ്യൂൾ ചെയ്തതുപോലെ, ശേഷിക്കുറവ്-MeterTester600 (IITC ലൈഫ് സയൻസ്, വുഡ്‌ലാൻഡ് ഹിൽസ്, CA, USA) ഉപയോഗിച്ച് എലികളുടെ പിൻകാലുകളുടെ ഭാരം വഹിക്കാനുള്ള ശേഷി അളക്കൽ നടത്തി. പിൻകാലുകളിലെ ഭാരം വിതരണം കണക്കാക്കി: ഭാരം വഹിക്കാനുള്ള ശേഷി (%)
